Cas9-gRNA 靶點效率檢測試劑盒
原理(lǐ)：
CRISPR/Cas9 是細菌和(hé)古細菌在長(cháng)期演化(huà)過程中形成的(de)一種适應性免疫防禦，可(kě)特異剪切外源的(de)病毒及 DNA 以對(duì)抗入侵。人(rén)工改造過的(de) Cas9/gRNA 系統通(tōng)過 gRNA(short guide RNA)引導 Cas9 蛋白識别并剪切帶有 gRNA 靶點的(de)雙鏈 DNA, 用(yòng)于基因敲除和(hé)精确
編輯 DNA 等操作。利用(yòng) CRISPR 技術進行基因敲除和(hé)編輯操作實驗前，獲得(de)剪切活性高(gāo)的(de) gRNA 靶點是實驗成功的(de)關鍵。Cas9/gRNA 剪切活性與 gRNA 靶點的(de)識别序列有關，每個(gè) gRNA 的(de)剪切活性都會不同。
本方法通(tōng)過 spCas9/gRNA 體外酶切靶點 DNA 片段，進行 gRNA 靶點活性的(de)評估。體外 spCas9 酶切 DNA 效果與 DNA 濃度、spCas9 酶量、反應時(shí)間、gRNA 的(de)量、靶點活性有關，爲了(le)科學地評價 gRNA 靶點效率，将固定 DNA 濃度和(hé) spCas9 酶量，在一定
單位時(shí)間内，測量 spCas9 酶切靶點 DNA 的(de)效率，并通(tōng)過與已知有活性的(de) gRNA 靶點進行比較，評價目标 gRNA 靶點的(de)活性。
産品組成：
| 組成 | 貨号 | VK007-10T | VK0107-30T |
Csa9 酶切試劑 | Cas9(1U/μL) | VK007-10 | 12μL | 34μL |
10×saCas9 buffer | VK007-11 | 50μL | 200μL |
外體轉錄試劑 | T7RNA Polymerase Mix(5U/μL) | VK007-12 | 22μL | 62μL |
rNTP(100mM,rATP/rUTP/rCTP/rGTP) | VK007-13 | 24μL | 64μL |
10×Transcription Buffer | VK007-14 | 24μL | 64μL |
Stop Solution | VK007-15 | 200μL | 500μL |
DNasel(1U/μL) | VK007-16 | 24μL | 64μL |
标準 gRNA | 标準 gRNA 模闆(50ng/μL) | VK007-17 | 20μL | 60μL |
标準 gRNA1(g1) 引物(wù) g1-FP(10μM) | VK007-18 | 10μL | 30μL |
标準 gRNA2(g2) 引物(wù) g2-FP(10μM) | VK007-19 | 10μL | 30μL |
反向引物(wù) gRNA-RP(10μM) | VK007-20 | 30μL | 100μL |
DEPC H2O | VK007-21 | 1mL | 1mL |
注意：收到試劑盒後，使用(yòng)前請離心，避免試劑滞留在離心管蓋上。
保存條件：請将産品于 -20℃ 保存，避免反複凍融。
京公網安備 11011402010692号
