TNBS 誘導結腸炎動物(wù)模型

TNBS多(duō)與乙醇合用(yòng)進行造模。該模型的(de)機制是乙醇破壞腸黏膜屏障，TNBS作爲一種有機酸半抗原滲入結腸組織，與組織蛋白等高(gāo)分(fēn)子物(wù)質結合，形成全抗原，使T淋巴細胞緻敏，溶解了(le)與半抗原結合的(de)動物(wù)自身細胞，引起腸壁一系列免疫應答(dá)和(hé)炎症反應，随著(zhe)組織的(de)逐漸修複，可(kě)

出現一系列腸壁的(de)增生性改變。

建模方法：
動物(wù)造模當日計爲實驗第1天，各組動物(wù)造模前禁食不禁水(shuǐ)24 h，乙醚吸入麻醉，将一直徑2.0 mm、長(cháng)約12 cm的(de)塑膠管由肛門輕緩插入大(dà)鼠體内

深約8 cm，緩慢(màn)注入一定濃度的(de)TNBS的(de)乙醇溶液，1 min之内完成。灌藥完畢後，緩慢(màn)拔出塑膠管，用(yòng)手捏住肛門，提起大(dà)鼠尾部，持續倒置3min，避免造模試劑流出，使造模劑充分(fēn)滲入大(dà)鼠腸腔内。對(duì)照(zhào)組動物(wù)使用(yòng)等體積的(de)生理(lǐ)鹽水(shuǐ)，按上述同樣操作進行灌腸。各組動物(wù)均正常飼

養。
TNBS的(de)乙醇溶液（将體積分(fēn)數爲5%的(de)TNBS水(shuǐ)溶液與無水(shuǐ)乙醇以體積2:1混合）現配現用(yòng)。

模型評價

1. 一般情況觀察及體重記錄
一般觀察：觀察各組動物(wù)的(de)情況，若出現意外症狀，記錄情況并及時(shí)反饋；記錄可(kě)能出現的(de)死亡率。體重：從給藥前一天開始，每三天稱量

并記錄各組動物(wù)體重，直至給藥結束，繪制體重變化(huà)曲線。實驗過程中體重共記錄10次體重統計、變化(huà)曲線作圖。

2. 腸組織取材及大(dà)體評分(fēn)：
各組動物(wù)安樂(yuè)死後，解剖時(shí)截取自肛門向上的(de)整段結腸組織

測量結腸長(cháng)度
3.進行宏觀評價：

各個(gè)結腸組織帶标尺拍(pāi)照(zhào)，記錄原始的(de)大(dà)體形态，依照(zhào)評分(fēn)标準進行評分(fēn)。

4.結腸組織病理(lǐ)染色：

組織做(zuò)以下(xià)處理(lǐ)：
每個(gè)結腸均分(fēn)成3段，每個(gè)動物(wù)取材的(de)位置要盡量一緻（不管剪切位置是否有病理(lǐ)損傷盡量保持一緻）。分(fēn)别取3段組織中的(de)前1厘米組織，

放入同1個(gè)EP管中，快(kuài)速冷(lěng)凍保存，備用(yòng)（可(kě)用(yòng)于分(fēn)子檢測）。
餘下(xià)3段組織片段，用(yòng)10%的(de)中性福爾馬林(lín)固定48小時(shí)，卷成“瑞士卷”， 用(yòng)石蠟進行包埋，切片，以便可(kě)以看到整個(gè)結腸周圍。後續進行HE染色進行組織病理(lǐ)學觀察。對(duì)每個(gè)樣本進行病理(lǐ)學評分(fēn)，并統計彙總。

5.标志因子水(shuǐ)平

第27天（最後一次給藥完成後24h），取各組動物(wù)血清，均分(fēn)爲兩份，凍存-80℃。
取其中一份血清樣本，ELISA檢測血清中IL-10、TNF-α含量。