脊髓損傷（SCI）大(dà)鼠

Allen’s法建立墜擊脊髓損傷模型

1. 取正常大(dà)鼠用(yòng)水(shuǐ)合氯醛作腹腔麻醉(350mg/kg)，将大(dà)鼠俯卧，固定于大(dà)鼠固定闆上，在背部脊髓兩側觸摸大(dà)鼠最下(xià)肋與軟組織分(fēn)界處(浮肋與第 13胸椎連接處)作爲骨定位标志，向上、下(xià)5 cm 範圍備皮、脫毛後常規消毒，鋪無菌手術單，在後正中線做(zuò)縱行切口，大(dà)約 3cm，依次

切開皮膚、皮下(xià)筋膜，暴露椎旁肌，約平對(duì)第 10 胸椎棘突，鈍性剝離肌肉暴露棘突、椎闆和(hé)橫突。參考定位：T9棘突傾向尾側，T10 棘突中立位，T11 棘突傾向頭側。

2.确定 T10胸椎位置，用(yòng)骨剪在 T9 與 T10、T10與T11 棘突及相應椎闆之間分(fēn)别做(zuò)兩個(gè)橫行剪口，再在 T10 胸椎兩側，橫突與椎闆連接處做(zuò)縱行剪口，形成一個(gè)方形剪口界線，然後用(yòng)咬骨鉗咬住 T10 胸椎棘突用(yòng)力拉起即“揭蓋”，去除 T10 椎闆，形成方形骨窗(chuāng)，修整骨窗(chuāng)邊緣，充分(fēn)暴露 T10對(duì)應的(de)脊髓。

3. 用(yòng)Allen' s 撞擊器制備脊髓損傷動物(wù)模型，打擊時(shí)，用(yòng)拉鈎拉開脊髓兩側軟組織，牽拉固定，使脊柱穩定，不受呼吸運動影(yǐng)響，使 20 g 重量的(de)擊打棍從 3 cm 高(gāo)度自由落體，緻傷能量 60 g·cm，撞擊T10 骨窗(chuāng)對(duì)應的(de)脊髓，造成急性脊髓損傷，擊打脊髓後，擊打棍不動，停留 3 min 再移開。

4. 撞擊成功标準爲：撞擊脊髓組織水(shuǐ)腫、出血，硬脊膜完整呈紫紅色，緊張，膨隆，大(dà)鼠尾巴出現痙攣性擺動，雙下(xià)肢軀體回縮樣撲動，呈遲緩性癱瘓。常規分(fēn)層縫合後回籠飼養。

5. 術後4W，水(shuǐ)合氯醛腹腔注射麻醉大(dà)鼠後，将大(dà)鼠固定于固定闆上，暴露脊髓 T8～ T12，迅速取出脊髓組織，4%多(duō)聚甲醛後固定 4 h，石蠟包埋切片(厚4um)，HE染色，觀察病理(lǐ)改變。

模型評價

1. 術後一般情況觀察 ：各損傷組大(dà)鼠的(de)術後基本情況基本一緻，打擊後大(dà)鼠均表現爲身體痙攣性顫動，尾巴痙攣性擺動，雙下(xià)肢及軀體回縮樣撲動。麻醉蘇醒後大(dà)鼠雙下(xià)肢呈弛緩性癱瘓，可(kě)出現尿潴留或尿失禁。解剖可(kě)見傷後大(dà)鼠硬脊膜内充血或水(shuǐ)腫。

2.做(zuò)BBB評分(fēn)：0分(fēn)：無可(kě)見後肢運動，1分(fēn)：一或兩個(gè)關節輕微運動，通(tōng)常爲髋和(hé)/或膝關節，都可(kě)認爲造模成功；

3.斜闆實驗：将大(dà)鼠身體垂直于斜闆的(de)縱軸放置，斜闆由自制的(de)表面粗糙的(de)木(mù)闆制成，大(dà)鼠利用(yòng)前肢和(hé)後肢的(de)力量保持身體停留自斜闆上。斜闆每次升高(gāo)或降低5度，以保證大(dà)鼠能停留在斜闆上5秒，以能停留5秒的(de)最大(dà)角度爲其功能值。

4.BDA示蹤術：術後5W，将大(dà)鼠麻醉後固定在腦(nǎo)立體定位儀上，縱行切開顱頂區(qū)頭皮，剪開骨膜并推向四周，雙氧水(shuǐ)棉簽擦拭顱骨，參考大(dà)鼠腦(nǎo)離體定位圖譜，以前囟爲原點，共選擇 8 個(gè)位置鑽孔，微量進樣器将5% BDA 溶液1μL注射入大(dà)鼠腦(nǎo)運動皮質區(qū)，進針深度自顱骨表面起始約3.5mm，微量注射泵設置注射時(shí)間爲5min，（留針5min）注射完畢後縫合頭皮。2w後取損傷節段以下(xià)脊髓組織标本進行BDA 熒光(guāng)染色，觀察皮質脊髓束神經纖維。

5.大(dà)鼠坐(zuò)骨神經熒光(guāng)金逆行追蹤：各組随機取大(dà)鼠，麻醉後沿股外側肌間隙顯露坐(zuò)骨神經，通(tōng)過組織鉗鉗夾挫傷坐(zuò)骨神經，在避光(guāng)條件下(xià)使用(yòng)微量注射器在坐(zuò)骨神經挫傷區(qū)多(duō)點注射2%熒光(guāng)金，每側坐(zuò)骨神經注射0.4ul，注射速度爲0.1ul/min。每注射位點留針5min，切口内撒8*104U的(de)青黴素粉劑，逐層縫合切口，造模後正常飼養。1周後予脊髓損傷處取材進行組織學檢查。進行冰凍切片，20um切片，每組每隻動物(wù)5張切片，熒光(guāng)顯微鏡下(xià)觀察熒光(guāng)金标記細胞的(de)分(fēn)布情況。

組織病理(lǐ)學

HE 染色可(kě)以觀察到假手術組灰、白質組織結構基本完整,神經細胞在灰質中分(fēn)布均勻、胞體飽滿、形态正常、細胞膜完整，白質内神經纖維排列整齊, 細胞間質均勻。SCI 組可(kě)見灰、白質組織結構不完整，損傷區(qū)灰質可(kě)見大(dà)片出血、大(dà)片壞死竈 、細胞腫脹、有的(de)出現囊腔，白質内神經纖維排列不規則。