小鼠步态分(fēn)析（墨迹法）

實驗準備：

1. 使用(yòng)由 3 塊8mm厚亞克力闆做(zuò)成，如圖所示的(de)隧道（内徑35cm*5cm*7cm）後面連接暗室（内部尺寸爲10cm*10cm*7cm，門徑長(cháng)寬5cm*7cm），下(xià)方準備使用(yòng)厚而光(guāng)滑的(de)紙張來(lái)跟蹤步驟（水(shuǐ)彩紙效果很好），将單條紙條成（長(cháng)40cm*寬5cm）壓在隧道下(xià)面。

2.使用(yòng)兩種對(duì)比色（如綠(lǜ)色和(hé)紫色）的(de)無毒可(kě)水(shuǐ)洗水(shuǐ)性水(shuǐ)彩顔料。爲後肢指定一種顔色，爲前肢指定第二種顔色。

實驗步驟：

1.   測試是前讓小鼠在新房(fáng)間适應30分(fēn)鐘(zhōng)，然後開始行爲分(fēn)析。此外，由于老鼠天生是夜間活動的(de)，因此在測試前确保所有老鼠都完全清醒并保持警覺至少 5 分(fēn)鐘(zhōng)。

2.   将紙條壓在隧道下(xià)面，并用(yòng)記号筆寫上小鼠的(de)信息和(hé)測試時(shí)間，并在隧道盡頭可(kě)以放置食物(wù)獎勵

3.   将要測試的(de)鼠标從籠子中取出，并牢牢抓住它的(de)頸背，确保抓住尾巴以穩定其後肢的(de)運動，用(yòng)同種顔料塗上前爪，使所有腳趾的(de)整個(gè)底面和(hé)腳的(de)中心都被油漆完全覆蓋，重複此操作将小鼠的(de)後爪塗上對(duì)應的(de)顔料。用(yòng)幹淨的(de)濕布擦去鼠标在其身體其他(tā)部位上的(de)任何油漆，以防止可(kě)能幹擾數據收集的(de)污迹。

4.   将鼠标放在隧道的(de)起點，讓它一直走到目标室，然後取回鼠标，用(yòng)濕布輕輕擦去它的(de)腳，然後将其放回籠子。

5.   之後用(yòng)乙醇或等效的(de)清潔溶液擦拭測試區(qū)域和(hé)隧道。

數據分(fēn)析

1.使用(yòng)始終間隔清晰、無污迹的(de)足迹進行評分(fēn)。如圖B所示的(de)是可(kě)以評分(fēn)的(de)足迹（每隻腳必須至少有 2 個(gè)連續的(de)步驟，但建議(yì)每隻腳 4-6 步，不要包括小鼠的(de)第一個(gè)和(hé)最後一個(gè)腳印）

2.使用(yòng)步幅長(cháng)度、步幅寬度和(hé)腳趾伸展作爲可(kě)以使用(yòng)此方法分(fēn)析的(de)三種不同步态度量。
注意：步幅長(cháng)度和(hé)寬度需要清晰的(de)連續打印，其中前足區(qū)域在油漆中明(míng)确定義。腳趾伸展不需要連續打印來(lái)評分(fēn)，隻需清晰打印單腳上的(de)第一個(gè)和(hé)最後一個(gè)腳趾。但是，如果給定的(de)足迹不包括在步幅長(cháng)度或寬度的(de)測量中，則不能對(duì)腳趾伸展進行評分(fēn)。所有三個(gè)度量都以厘米爲單位進行評估。

a)   将步幅定義爲由同一隻腳創建的(de)兩個(gè)連續足迹之間的(de)距離（即，一個(gè)步幅）（圖 1 A、1B）。

         i.      用(yòng)鉛筆在兩個(gè)前肢腳印（由上面指定的(de)顔色标識）的(de)前腳區(qū)域周圍畫(huà)一個(gè) 2-4 毫米的(de)圓圈，并用(yòng)尺子在它們之間畫(huà)一條線。

        ii.      記錄從每個(gè)圓圈中間（即每個(gè)腳墊的(de)中心）的(de)兩個(gè)打印之間的(de)距離爲右前 1 (RF1) 或左前 1 (LF1)。

      iii.      重複所有可(kě)以評分(fēn)的(de)步驟（RF2、LF2、RF3、LF3 等）。

        iv.      重複左右後肢腳印。

         v.      平均每個(gè)肢體的(de)所有個(gè)人(rén)記錄的(de)步幅距離。對(duì)于統計分(fēn)析，可(kě)以将各個(gè)群組成員(yuán)一起平均。

b)   将步幅寬度定義爲左右前肢或後肢之間距離的(de)度量（圖 1 A、1B）。

         i.      爲了(le)評估這(zhè)個(gè)距離，從一個(gè)後肢的(de)前足圓圈區(qū)域繪制并測量一條線，該線與對(duì)側後肢的(de)步幅線垂直相交。

        ii.      對(duì)所有可(kě)以評分(fēn)的(de)後肢打印重複此操作，然後平均測量值。前肢和(hé)後肢的(de)步幅計算(suàn)方法相同。

c)   将腳趾展開定義爲單個(gè)前肢或後肢足迹上第一個(gè)和(hé)最後一個(gè)腳趾之間的(de)距離（圖1A、1B）。

         i.      使用(yòng)卡尺測量第一個(gè)腳趾印的(de)尖端和(hé)最後一個(gè)腳趾印的(de)尖端之間的(de)距離。

        ii.      對(duì)所有可(kě)以評分(fēn)的(de)後肢打印重複并平均測量值。前肢和(hé)後肢腳趾伸展的(de)計算(suàn)方法相同。

2.   如果紙不能被評分(fēn)，讓動物(wù)休息 10 分(fēn)鐘(zhōng)，然後再試一次。