大(dà)鼠球囊損傷實驗

1.   實驗目的(de)與背景

動脈粥樣硬化(huà)(atherosclerosis.AS)是危害人(rén)類健康的(de)一類疾病，是導緻人(rén)類死亡的(de)頭号殺手，因此，國内外醫學界對(duì)AS關注程度也(yě)日益增長(cháng)。長(cháng)期以來(lái)，國内外學者對(duì)AS的(de)發病機制進行研究，學說甚多(duō)，但确切病因尚未完全閘明(míng)。傳統的(de)學說如脂質滲入學說、血栓源學說、中層平滑肌細胞增生學說、巨噬細胞受體缺失學說、血流動力學學說、内皮細胞損傷學說及損傷應答(dá)和(hé)炎症學說等，其中任意一種學說均不能全面解釋AS的(de)發生與發展。AS發病機制和(hé)治療對(duì)策的(de)探究成了(le)醫學研究的(de)熱(rè)點。選擇合适的(de)動物(wù)成功建立動物(wù)模型是研究AS發病機制及探討(tǎo)治療措施的(de)重要條件。因此。在本模型的(de)建立過程中，力求更貼切的(de)模拟臨床病變，爲AS發病機制探討(tǎo)和(hé)治療方法的(de)改進研究提供與臨床病例最爲相似的(de)實驗對(duì)象。

背景：

AS是一種全身性疾病，主要累及大(dà)中動脈，基本病變是動脈内膜的(de)脂質沉積、内膜竈狀纖維化(huà)及平滑肌細胞和(hé)結緣組織增生，引起内膜竈性纖維性增厚及粥樣班塊形成，使動脈壁變硬，管腔狹窄，并引起繼發性病變，特别是心、腦(nǎo)血管等器官的(de)缺血性病變。動脈内膜損傷是促使AS形成的(de)最重要危險因素，所以可(kě)以用(yòng)機械性損傷動脈内膜聯合高(gāo)脂飲食來(lái)建立AS模型。目前報道的(de)機械性内膜損傷方法有兩種：球囊損傷術及空氣幹燥術。球囊損傷術主要造成内皮細胞的(de)即刻剝脫。彈力闆及中膜嚴重損傷。

2.實驗材料

2.1動物(wù)：

表3  實驗動物(wù)信息

2.2主要試劑、耗材：

眼科剪，眼科鑷，手術剪，輔料鑷，手術縫合線，縫合針，止血鉗，止血夾，持針器，2mm球囊，大(dà)鼠手術台，棉簽，紗布塊，注射器，碘酒棉球，酒精棉球。

2.3主要儀器：

顯微鏡

冷(lěng)光(guāng)源

3實驗方法

3.1術前準備

1.術前準備：選擇鍵康大(dà)鼠作爲實驗對(duì)象，手術器械和(hé)敷料均經過121℃，60min高(gāo)壓滅菌，球囊采取75%酒精消毒。

2.自制拉鈎：将回形針一端和(hé)橡皮筋鈎在一起并固定。回形針另一端做(zuò)45度彎曲，用(yòng)于鈎挂組織，将橡皮筋另一端以蛙釘置定在手術台上。可(kě)以任意調節蛙釘位置而改變牽拉的(de)力度。

3.麻醉。大(dà)鼠腹腔注射5ml（10%三溴乙醇）麻藥。

4.抗感染、消毒 。術前、術後常規腹腔給予4×104U慶大(dà)黴素及頸部皮膚消毒。

5.擴大(dà)手術視野。頸正中切開皮膚，分(fēn)離皮下(xià)組織與肌肉。

6.遊離和(hé)結紮血管。充分(fēn)遊離頸總動脈、頸内外動脈，永久結紮頸外動脈後遠(yuǎn)心端，頸内動脈，頸總動脈近心端臨時(shí)結紮，可(kě)以阻斷血流，防止頸外動脈切口處大(dà)出血。

7.拖傷内膜，建立模型。阻斷血流後，于頸外動脈近端剪開一切口，插入 2F 球囊導管至頸總動脈遠(yuǎn)端。注入 200 μL 生理(lǐ)鹽水(shuǐ)使球囊膨脹，來(lái)回拉球囊至頸内動脈與頸外動脈交叉處，抽出生理(lǐ)鹽水(shuǐ)，重新插入導管，重複上述操作 3 次後拔出導管，結紮頸外動脈并縫合。手術局部使用(yòng)青黴素以防止感染。

3.2具體操作步驟

1.把大(dà)鼠麻醉後用(yòng)膠帶固定在手術台上，根據頸總動脈搏動确定頸總動脈的(de)位置，沿頸總動脈走行縱向切開皮膚。

2.用(yòng)彎止血鑷純性分(fēn)離組織，并以自制拉鈎牽拉開皮層和(hé)基層，使頸動脈充分(fēn)暴露，改用(yòng)顯微鑷挑開分(fēn)離出頸動脈。分(fēn)離長(cháng)度大(dà)約2-3cm，分(fēn)離時(shí)動作要輕柔，用(yòng)棉簽來(lái)回輕輕剮蹭，不得(de)用(yòng)刀(dāo)剪等銳利器械，以防止損傷血管和(hé)神經，特别在分(fēn)離神經時(shí)動作不僅要輕，而且不能大(dà)幅度牽拉，以避免對(duì)大(dà)鼠産生較大(dà)的(de)刺激。

3.結紮頸總動脈前先穿三根手術線備用(yòng)，選擇4-0号手術縫合線做(zuò)結紮。結紮頸總動脈的(de)近心端，結盡量打牢。防止插入球囊時(shí)脫落。

4.提起頸總動脈，分(fēn)離出頸内外動脈(圖1)，用(yòng)止血夾夾住頸内動脈，以阻斷動脈血流爲止，然後用(yòng)止血鉗夾住一備線兩端，結紮頸外動脈近頭端（距離分(fēn)叉5mm處）使頸總動脈血流保持被阻斷狀态（圖2）。

5.球囊選擇直徑2mm的(de)，排出空氣。并且減小球囊體積，以利于進入頸總動脈。

6.拉起頸外動脈遠(yuǎn)心端打結的(de)縫合線，用(yòng)眼科鑷向心方向剪一“V”型口，注意不要把頸外動脈剪斷，剪開部分(fēn)不要超過頸總動脈直徑的(de)1/2，最好控制在1/3左右。

7.“V“型口剪好後，迅速将處理(lǐ)過的(de)球囊尖端插入頸總動脈，再以左手提起遠(yuǎn)心端的(de)結紮線，右手稍稍用(yòng)力向前推進，遇阻力則稍稍反向牽拉，重新向心插入，在球囊進入2-3cm處（圖3）。

8.用(yòng)球囊自帶注射器連接球囊導管端，注入生理(lǐ)鹽水(shuǐ) 200 μL ，使球囊膨大(dà)，然後向後牽拉球囊末端，用(yòng)力多(duō)拉出1cm左右，然後回抽注射器液體，再重新向心插入球囊，重複上述步驟，如此反複2-3次（圖4）。（注意：每次插入拔出球囊，近心端松緊需要控制好，不然出血無法控制）

9.最後把球囊中的(de)液體抽出，然後緩慢(màn)拉出球囊，并及時(shí)拉緊頸外動脈近心端的(de)備線，結紮近心端（分(fēn)叉處）。剪掉結紮點多(duō)餘的(de)縫合線，放開頸内動脈止血夾，頸總動脈結紮線，恢複血流，頸總保持搏動（圖5），肌肉恢複原位，縫合皮層，做(zuò)消毒處理(lǐ)即可(kě)。

4.模型檢測

4.1血常規病理(lǐ)檢測

4.2取材頸動脈

注意事項：

6.1球囊導管直徑選擇：大(dà)鼠：2.0mm，此種直徑最爲合适，當然實驗動物(wù)的(de)大(dà)小也(yě)有一定要求，大(dà)鼠一般選擇250g左右。

6.2用(yòng)眼科剪剪開血管後，要趁血液流出的(de)那一刻迅速将球囊插入血管，否則需要期直眼科鑷輕輕猶庭新口。再把球囊插入。

6.3球囊達到頸總動脈中段後，反複牽拉時(shí)，用(yòng)力一定要輕，以防拉斷頸主動脈的(de)細小分(fēn)支，而竟移腔内出血，動物(wù)意外死亡。