品系基本信息
特性和(hé)用(yòng)途
基因敲除小(大(dà))鼠
唯尚立德擁有成熟高(gāo)效的(de)TALEN及CRISPR/Cas9基因敲除技術平台、完善的(de)模式生物(wù)構建平台,完美(měi)整合從載體設計、構建、活性鑒定、基因突變動物(wù)模型建立等各個(gè)環節。現推出小鼠、大(dà)鼠等模式生物(wù)基因敲除技術服務,爲客戶提供周期短、性價比高(gāo)的(de)模式生物(wù)構建服務。至今未曾失敗過,我們鄭重承諾失敗将全額退款。
TALEN靶向敲除基因原理(lǐ)簡介
TALE技術(Transcription activator-like effectors)是一種嶄新的(de)分(fēn)子生物(wù)學工具。科學家發現,來(lái)自植物(wù)細菌Xanthomonassp的(de)TAL蛋白的(de)核酸結合域的(de)氨基酸序列與其靶位點的(de)核酸序列有恒定的(de)對(duì)應關系。利用(yòng)TAL的(de)序列模塊,可(kě)組裝成特異結合任意DNA序列的(de)模塊化(huà)蛋白。TALEN(Transcription activator-like effector(TAL) nucleases)技術是基于TALE與人(rén)工改造的(de)核酸内切酶的(de)切割域(FokI)構建針對(duì)任意特定核酸靶序列的(de)重組核酸酶。通(tōng)過TAL的(de)DNA識别域結合到靶位點上,及FokI切割域形成二聚體後,可(kě)特異性對(duì)目标DNA序列實現切斷。在随後的(de)非同源末端連接修複過程中,斷開的(de)DNA雙鏈會由于堿基的(de)随機增減從而以一定的(de)概率實現目标基因功能的(de)缺失。
CRISPR/Cas9靶向敲除基因原理(lǐ)簡介
CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是一種由RNA指導Cas核酸酶對(duì)特定基因序列進行DNA修飾的(de)技術。CRISPR/CRISPR-associated(Cas)是細菌和(hé)古細菌一種不斷進化(huà)适應的(de)免疫防禦機制。在這(zhè)系統中,CRISPR對(duì)特定DNA的(de)識别是由crRNA或向導RNA通(tōng)過堿基互補配對(duì),定向尋找目标DNA序列。靶定目标序列後,Cas9蛋白負責對(duì)目标DNA進行剪切,造成靶DNA雙鏈斷裂。在随後的(de)非同源末端連接修複過程中,斷開的(de)DNA雙鏈會由于堿基的(de)随機增減從而以一定的(de)概率實現目标基因功能的(de)缺失。
TALEN/CRISPR構建基因敲除小(大(dà))鼠技術流程圖
服務流程及周期
流程及周期圖
步驟 | 内容 | 周期 |
打靶質粒構建 | 設計不同靶點,SNP檢測,組裝TALEN質粒2-3對(duì),或3條gRNA,檢測TALEN的(de)SSA活性或gRNA活性 | 1個(gè)月(yuè) |
得(de)到Founder | 選擇活性較高(gāo)的(de)打靶質粒,體外轉錄成mRNA,顯微注射受精卵,胚胎移植到代孕母鼠子宮,3周後出生,2周齡基因型鑒定。數量:至少2隻 | 2-3個(gè)月(yuè) |
得(de)到F1代雜(zá)合子 | 2個(gè)月(yuè)後性成熟,Founder和(hé)野生型小鼠交配,3周後出生,2周齡基因型鑒定,獲得(de)穩定傳代的(de)基因突變雜(zá)合子F1代。數量:2個(gè)lines、至少2隻/line(性别随機,若甲方要求一雌一雄,如果第一批F1代小鼠都是同性别,則進行第二次交配,每次交配到生出需3個(gè)月(yuè),依此類推,直至一雌一雄。) | 3-4個(gè)月(yuè) |
我們的(de)優勢
1、我們已經具有4000多(duō)對(duì)TALEN質粒、CRISPR/Cas9系統構建和(hé)活性驗證的(de)成功經驗,大(dà)量的(de)技術經驗使我們能準确、快(kuài)速地構建出具有體内活性的(de)TALEN和(hé)CRISPR/Cas9質粒。
2、我們具有強大(dà)的(de)售前和(hé)售後技術支持團隊,可(kě)以爲客戶提供免費專業的(de)技術支持和(hé)方案設計及拓展。
3、我們已經成功使用(yòng)TALEN及CRISPR/Cas9系統爲客戶提供了(le)上百例成功案例,囊括家蠶、斑馬魚、小鼠、大(dà)鼠等突變體,至今未曾失敗過,我們的(de)服務受到了(le)客戶的(de)一緻認可(kě)。
4、價格低、周期短。我們高(gāo)效專業的(de)技術平台使得(de)我們能在最短的(de)時(shí)間内完成模式生物(wù)的(de)構建服務。較短的(de)時(shí)間使得(de)我們能夠大(dà)大(dà)的(de)節約成本,爲客戶提供價格最低的(de)服務
驗證數據
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