定點敲入小(大(dà))鼠
技術原理(lǐ)簡介
基因敲入(Knockin)鼠是指通(tōng)過TALEN/CRISPR技術在目的(de)序列位置引進特定的(de)突變或外源基因的(de)小鼠。通(tōng)過針對(duì)基因靶序列設計相應的(de)打靶質粒，然後根據需要插入的(de)位置構建含Knockin片段或點突變的(de)Donor質粒，将Donor質粒與打靶質粒共同顯微注射進小鼠的(de)受精卵中，TALEN/CRISPR定位到基因組上的(de)靶序列并切割雙鏈DNA，在随後的(de)修複過程中，細胞以含同源序列的(de)Donor質粒爲模版修複基因組DNA，最終獲得(de)在目的(de)DNA序列插入Knockin片段的(de)Knockin小鼠。比如将報告基因(如EGFP，mRFP，mCherry，mYFP，或LacZ等)通(tōng)過同源重組的(de)方式引入目的(de)基因的(de)特定位點，從而跟蹤目标基因的(de)表達；也(yě)可(kě)以用(yòng)報告基因取代大(dà)小鼠本身的(de)基因，即：KO/KI同時(shí)發生。
TALEN/CRISPR構建定點敲入小(大(dà))鼠技術流程圖
服務流程及周期
服務流程及周期圖：
步驟
| 内容
| 周期 |
敲入元件獲得(de)
| 客戶提供或全基因合成 | 根據實際情況而定 |
Cas9/gRNA的(de)合成和(hé)同源模闆(Donor)構建
| 合成Cas9/gRNA，檢測Cas9/gRNA活性，構建同源模闆質粒
| 2個(gè)月(yuè) |
| 得(de)到Founder | Cas9/gRNA體外轉錄成mRNA和(hé)Donor質粒共同顯微注射受精卵，胚胎移植到代孕母鼠子宮，3周後出生，2周齡基因型鑒定。 | 2-3個(gè)月(yuè) |
得(de)到F1代雜(zá)合子
| 2個(gè)月(yuè)後性成熟，Founder和(hé)野生型小鼠交配，3周後出生，2周齡基因型鑒定，獲得(de)穩定傳代的(de)基因突變雜(zá)合子F1代。 | 3-4個(gè)月(yuè) |
京公網安備 11011402010692号
