點突變小(大(dà))鼠
在目的(de)基因上引入點突變，對(duì)于疾病模型的(de)建立具有重大(dà)的(de)意義，如候選點突變是基因疾病相關的(de)人(rén)類基因SNP，對(duì)目标基因的(de)候選位點進行點突變，若動物(wù)模型上再現了(le)該疾病的(de)性狀，則建立的(de)小鼠模型可(kě)以爲精準治療提供模拟人(rén)類疾病的(de)動物(wù)模型。
技術原理(lǐ)簡介
基因點突變(Point Mutation)是指通(tōng)過TALEN/CRISPR技術在靶基因的(de)目的(de)位置引進特定的(de)突變。通(tōng)過針對(duì)靶基因的(de)待突變位點設計相應的(de)打靶質粒，并且根據需要點突變的(de)位置構建含點突變的(de)Donor質粒，将Donor質粒與打靶質粒共同顯微注射進小鼠的(de)受精卵中，TALEN/CRISPR定位到基因組上的(de)靶序列并切割雙鏈DNA，在随後的(de)修複過程中，細胞以含同源序列的(de)Donor質粒爲模版修複基因組DNA，最終獲得(de)在目的(de)DNA序列引進點突變的(de)小鼠。
TALEN/CRISPR構建定點敲入小(大(dà))鼠技術流程圖
服務流程及周期
服務流程及周期圖：
| 步驟 | 内容
| 周期 |
| 敲入元件獲得(de) | 客戶提供或全基因合成 | 根據實際情況而定 |
| Cas9/gRNA的(de)合成和(hé)同源模闆(Donor)構建 | 合成Cas9/gRNA，檢測Cas9/gRNA活性，構建同源模闆質粒 | 2個(gè)月(yuè) |
| 得(de)到Founder | Cas9/gRNA體外轉錄成mRNA和(hé)Donor質粒共同顯微注射受精卵，胚胎移植到代孕母鼠子宮，3周後出生，2周齡基因型鑒定。 | 2-3個(gè)月(yuè) |
得(de)到F1代雜(zá)合子
| 2個(gè)月(yuè)後性成熟，Founder和(hé)野生型小鼠交配，3周後出生，2周齡基因型鑒定，獲得(de)穩定傳代的(de)基因突變雜(zá)合子F1代。 | 3-4個(gè)月(yuè) |
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