品系基本信息
特性和(hé)用(yòng)途
條件性過表達小(大(dà))鼠
技術原理(lǐ)簡介
條件性過表達小(大(dà))鼠的(de)構建主要是通(tōng)過Cre/LoxP重組系統來(lái)實現的(de)。該系統是位點特異性重組酶系統，已發展成爲在體内、外進行遺傳操作的(de)有力工具。其可(kě)以使靶基因的(de)表達或缺失發生在試驗動物(wù)發育的(de)某一階段或某一特定的(de)組織器官。此外，若與控制Cre表達的(de)其他(tā)誘導系統相結合，還(hái)可(kě)以對(duì)某一基因同時(shí)實現時(shí)空兩方面的(de)調控。通(tōng)過構建帶有廣泛表達啓動子-LoxP-Stop-LoxP-目的(de)基因的(de)條件性調控表達框架，通(tōng)過顯微注射制備在特定位點，如Rosa26, H11等位點，帶有條件性調控表達框架的(de)敲入小(大(dà))鼠模型，轉基因在正常情況下(xià)并不表達，隻有與相應的(de)組織特異性表達的(de)Cre/CreERT2小鼠雜(zá)交後，因Stop終止序列在特定的(de)組織中被去除，從而達到轉基因在誘導性/特定組織中特異性表達的(de)目的(de)。
Rosa26或H11位點的(de)優勢：
表達Pattern穩定: 定點敲入構建過表達，不像随機插入基因組的(de)轉基因，表達特異性和(hé)表達量（expression pattern）穩定
表達Pattern不受上下(xià)遊DNA元件影(yǐng)響： Rosa26 or Hipp11(H11)無影(yǐng)響基因特異表達的(de)調控元件，不會影(yǐng)響敲入的(de)啓動子的(de)表達Pattern
TALEN/CRISPR構建條件性敲除小(大(dà))鼠技術流程圖
服務流程及周期
服務流程及周期圖
| 步驟 | 内容 | 周期 |
| 轉基因元件獲得(de) | 客戶提供或全基因合成 | 根據實際情況而定 |
| Cas9/gRNA的(de)合成和(hé)同源模闆(Donor)構建 | 合成Cas9/gRNA，檢測Cas9/gRNA活性，構建同源模闆質粒 | 2個(gè)月(yuè) |
| 得(de)到Founder | Cas9/gRNA體外轉錄成mRNA和(hé)Donor質粒共同顯微注射受精卵，胚胎移植到代孕母鼠子宮，3周後出生，2周齡基因型鑒定。 | 2-3個(gè)月(yuè) |
| 得(de)到F1代雜(zá)合子 | 2個(gè)月(yuè)後性成熟，Founder和(hé)野生型小鼠交配，3周後出生，2周齡基因型鑒定，獲得(de)穩定傳代的(de)基因突變雜(zá)合子F1代。 | 3-4個(gè)月(yuè) |
驗證數據
查看條件性過表達小(大(dà))鼠産品說明(míng)書(shū)
與唯尚立德一起，共同創造更多(duō)價值。
京公網安備 11011402010692号
