CRISPR/Cas9 載體構建服務
簡介：
Clustered regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR)/Cas9是細菌和(hé)古細菌的(de)一種不斷進化(huà)适應的(de)免疫防禦機制。CRISPR/Cas9利用(yòng)一段小 RNA 來(lái)識别并進行有效的(de)靶向DNA剪切。
（來(lái)自Nature Biotech. 2012:30, 836–838）
服務内容：CAS9/gRNA質粒構建全套解決方案
步驟 | 服務内容 | 配套産品 |
明(míng)确物(wù)種和(hé)載體 | 不同物(wù)種不同載體，清單請詳見:CRISPR/Cas9快(kuài)速構建試劑盒 |
|
設計靶點 | 一般在不同轉錄産物(wù)的(de)共同外顯子上設計3-5個(gè)靶點，靶點位置盡量在基因CDS的(de)前1/3，ATG之後，不在最後一個(gè)exon上，最好能破壞重要的(de)domain和(hé)所有的(de)轉錄産物(wù)isoform。 |
|
合成 | 合成前請檢測靶點是否存在SNP | T7E1酶 |
靶點切割活性檢測 | 293T細胞内檢測SSA活性 | CAS9酶體外切割活性驗證 | SSA活性報道質粒構建試劑盒、Cas9-gRNA靶點效率檢測試劑盒、CAS9酶 |
内源活性驗證（有條件選擇） | 若目的(de)細胞轉染效率高(gāo)，如293T細胞，可(kě)轉染72h後提基因組，擴增靶序列，T7E1酶切驗證，進一步測序驗證。 | T7E1酶
|
京公網安備 11011402010692号
