山東大(dà)學附屬濟南(nán)市中心醫院腫瘤科的(de)孫玉萍教授團隊在雜(zá)志 Theranostics (IF=10.849) 上發表文章(zhāng)《ILT4 inhibition prevents TAM- and dysfunctional T cell-mediated immunosuppression and enhances the efficacy of anti-PD-L1 therapy in NSCLC with EGFR activation 》。

針對(duì) PD-1/PD-L1 通(tōng)路的(de)免疫檢查點抑制劑 (ICI) 在非小細胞肺癌 (NSCLC) 患者中的(de)治療成功率有限，尤其是在那些具有激活性表皮生長(cháng)因子受體 (EGFR) 突變的(de)患者中。因此，迫切需要闡明(míng) EGFR 介導的(de)腫瘤免疫逃逸的(de)機制和(hé)開發有效的(de)免疫療法。該項研究利用(yòng) mRNA 芯片和(hé) TCGA 數據庫以及 WB 驗證等方法，分(fēn)析得(de)出 EGFR 可(kě)以調節 ILT4 表達的(de)分(fēn)子機制；通(tōng)過細胞增殖和(hé)凋亡等實驗，分(fēn)析得(de)出 ILT4 對(duì)腫瘤細胞的(de)增殖和(hé)凋亡具有調節作用(yòng)；通(tōng)過 Transwell 遷移和(hé)流式細胞檢測等方法，對(duì) ILT4 and PD-L1 對(duì)腫瘤相關巨噬細胞(TAM)的(de)募集和(hé)極化(huà)的(de)影(yǐng)響進行了(le)分(fēn)析；通(tōng)過 CFSE 增殖和(hé)細胞凋亡等實驗，分(fēn)析了(le) ILT4 and PD-L1 對(duì) T 細胞的(de)存活和(hé)細胞毒性的(de)影(yǐng)響；研究發現在 NSCLC 細胞中被激活的(de) EGFR-AKT and ERK1/2 信号通(tōng)路可(kě)誘導 ILT4 的(de)表達。過表達的(de) ILT4 通(tōng)過招募 M2 樣的(de)腫瘤相關巨噬細胞(M2-like TAMs)和(hé)破壞 T 細胞的(de)反應來(lái)抑制對(duì)腫瘤的(de)免疫反應；而對(duì) ILT4 的(de)抑制可(kě)以防止免疫抑制的(de)産生并且阻止腫瘤的(de)進展。這(zhè)一研究結果爲增進對(duì) EGFR 介導的(de)腫瘤免疫逃逸新機制的(de)了(le)解提供了(le)幫助，并爲 EGFR 激活型的(de) NSCLC 患者的(de)免疫治療提供了(le)新的(de)策略。北(běi)京唯尚立德有幸爲該研究提供了(le)免疫缺陷性的(de) NVSG 小鼠，爲能夠對(duì)科研人(rén)員(yuán)對(duì)腫瘤的(de)進展和(hé)治療的(de)研究提供一定的(de)助力而深感榮幸。

研究人(rén)員(yuán)首先通(tōng)過 IHC， qPCR， WB 等方法确定了(le)在 NSCLC 細胞中活化(huà)的(de) EGFR 可(kě)誘導 ILT4 的(de)表達。

爲了(le)進一步研究 EGFR 誘導 ILT4 表達的(de)分(fēn)子機制，研究人(rén)員(yuán)通(tōng)過 mRNA 芯片和(hé) TCGA 數據庫數據挖掘以及 WB 驗證等方法，研究證明(míng)活化(huà)的(de) EGFR 是通(tōng)過激活的(de) ERK and AKT 信号通(tōng)路來(lái)誘導 ILT4 的(de)表達的(de)。

爲了(le)進一步研究 ILT4 在 EGFR 激活的(de) NSCLC 發病機制中的(de)作用(yòng)，研究人(rén)員(yuán)通(tōng)過基因敲除和(hé)生物(wù)信息學研究等方式，通(tōng)過免疫組化(huà)、細胞遷移、ELISA、細胞增殖和(hé)流式細胞等實驗方法，表明(míng)激活的(de) EGFR 在腫瘤細胞中通(tōng)過 ILT4 來(lái)促進腫瘤相關巨噬細胞(TAM)的(de)募集和(hé) M2 樣的(de)極化(huà)的(de)(M2-like polarization)。

由于通(tōng)過 TCGA 的(de)數據分(fēn)析表明(míng) ILT4 的(de)表達與 T 細胞的(de)浸潤反應呈現顯著的(de)相關性，因此研究人(rén)員(yuán)通(tōng)過免疫組化(huà)、細胞增殖、細胞凋亡和(hé)細胞溶解等實驗方法，研究發現在腫瘤細胞中激活的(de) EGFR 所誘導的(de) ILT4 的(de)表達會損害 T 細胞的(de)增殖以及減弱 T 細胞的(de)細胞毒性反應。

通(tōng)過上面的(de)研究，結果表明(míng)在 EGFR 激活型的(de)腫瘤細胞中 ILT4 是通(tōng)過對(duì) M2 樣的(de) TAM 的(de)募集和(hé)對(duì) T 細胞存活和(hé)細胞毒性的(de)抑制來(lái)介導免疫抑制的(de)。因此，研究人(rén)員(yuán)繼續探討(tǎo)了(le)對(duì) ILT4 的(de)阻斷對(duì)免疫檢查點抑制劑(ICI)療效的(de)影(yǐng)響。通(tōng)過細胞遷移、ELISA、qPCR、流式細胞等實驗方法，研究發現在 EGFR 激活型的(de) NSCLC 細胞中通(tōng)過對(duì) ILT4 和(hé) PD-L1 的(de)聯合阻斷可(kě)以協同改善 TAM 和(hé)功能失調的(de) T 細胞所介導的(de)免疫抑制反應。

由于前面的(de)體外研究的(de)結果表明(míng)對(duì) ILT4 的(de)阻斷可(kě)以顯著的(de)削弱免疫抑制的(de)作用(yòng)并增強 PD-L1 抑制劑的(de)抗腫瘤效果。因此，接下(xià)來(lái)研究人(rén)員(yuán)探討(tǎo)了(le) ILT4 和(hé) PD-L1 的(de)聯合治療在體内是否依然具有控制腫瘤進展、巨噬細胞(M2-like TAMs)浸潤和(hé) T 細胞功能障礙的(de)協同作用(yòng)。通(tōng)過野生型(WT)和(hé)免疫缺陷型(NVSG)兩種小鼠模型來(lái)進行腫瘤藥效的(de)研究，結果表明(míng)在體内對(duì) PIR-B(小鼠中的(de)人(rén) ILT4 的(de)直系同源基因)和(hé) PD-L1 的(de)阻斷可(kě)以協同阻止腫瘤的(de)生長(cháng)和(hé)免疫逃逸反應。

由于對(duì)具有 TKI 耐藥性的(de) EGFR 突變的(de) NSCLC 患者來(lái)說，免疫治療是另外一種主要的(de)治療途徑，因此在臨床上 ICI 的(de)耐藥依然是目前一個(gè)比較棘手的(de)挑戰。所以接下(xià)來(lái)研究人(rén)員(yuán)對(duì)阻斷 ILT4 對(duì) ICI 耐藥性所可(kě)能産生的(de)影(yǐng)響來(lái)進行了(le)研究。通(tōng)過在 NVSG 小鼠中來(lái)重構免疫治療的(de)模型，研究發現對(duì) ILT4 的(de)阻斷在體内抑制了(le) EGFR 突變所導緻的(de) TKI 耐藥的(de) NSCLC 腫瘤的(de)進展和(hé)免疫逃逸反應。結果表明(míng)，對(duì) ILT4 的(de)阻斷可(kě)能是對(duì) EGFR-TKI 治療産生耐藥的(de) EGFR 突變患者的(de)一個(gè)有效的(de)治療策略。

又因爲在大(dà)多(duō)數的(de)臨床試驗中 ICI 治療已被應用(yòng)于對(duì) EFGR 未突變的(de) NSCLC 患者來(lái)進行治療，但治療的(de)效果表明(míng)，大(dà)多(duō)數的(de)患者對(duì) ICI 治療并不太敏感。因此，研究人(rén)員(yuán)接下(xià)來(lái)對(duì) ILT4 和(hé) PD-L1的(de)聯合治療在體内對(duì) EGFR 野生型的(de) NSCLC 腫瘤的(de) ICI 治療的(de)療效來(lái)進行了(le)研究，通(tōng)過使用(yòng) NVSG 小鼠來(lái)建立重構的(de)免疫治療的(de)小鼠模型的(de)方法，研究發現阻斷 ILT4 可(kě)以顯著的(de)增強 PD-L1 抑制劑在體内對(duì) EGFR 未突變的(de) NSCLC 腫瘤的(de)療效。

本研究所用(yòng) NSG(NVSG) 免疫缺陷小鼠由北京天糧生物科技有限公司提供。本公司成立于 2011 年 3 月(yuè)，是由來(lái)自北(běi)京大(dà)學、中國醫學科學院的(de)科研團隊産業轉化(huà)而來(lái)的(de)國家高(gāo)新技術企業，也(yě)是國内第一家提供基因編輯技術服務的(de)公司，擁有豐富、成熟的(de)基因編輯動物(wù)構建經驗。此外，本公司也(yě)可(kě)提供動物(wù)繁育、動物(wù)實驗和(hé)數據分(fēn)析等一站式服務。爲廣大(dà)科研工作者的(de)科學研究工作保駕護航。

原文鏈接：https://dx.doi.org/10.7150%2Fthno.52435

返回列表