圖爲 在原代T細胞中進行人(rén)ORF文庫篩選
論文第一作者、 Sanjana實驗室博士後Mateusz Legut博士說，“我們的(de)目标是采用(yòng)現有的(de)免疫療法，并使它們變得(de)更好。我們對(duì)LTBR如此明(míng)顯地增強CAR療法感到吃(chī)驚。這(zhè)是朝著(zhe)開發下(xià)一代CAR-T細胞療法邁出的(de)重要一步。”
這(zhè)些作者發現，添加LTBR會重建T細胞的(de)基因組，觸發許多(duō)其他(tā)能增強T細胞功能的(de)基因的(de)表達。他(tā)們能夠通(tōng)過結合基因過表達篩選和(hé)單細胞基因組學迅速了(le)解LTBR和(hé)類似修飾基因的(de)影(yǐng)響。他(tā)們開發的(de)新方法---OverCITE-seq---使得(de)他(tā)們能夠測試不同修飾基因對(duì)T細胞細胞狀态的(de)影(yǐng)響，其中包括每個(gè)基因的(de)表達、裝飾細胞表面的(de)蛋白以及每個(gè)細胞表達的(de)獨特T細胞受體（克隆型）。OverCITE-seq讓他(tā)們詳細了(le)解了(le)每個(gè)修飾基因如何提高(gāo)T細胞活性，并且在單細胞實驗中對(duì)所有排名靠前的(de)基因都是這(zhè)樣做(zuò)的(de)。對(duì)于LTBR來(lái)說，這(zhè)産生了(le)一個(gè)早期線索，即大(dà)量的(de)基因正在發生變化(huà)，導緻他(tā)們進一步确定了(le)一個(gè)被充分(fēn)研究的(de)稱爲NF-kB的(de)基因表達調節因子驅動許多(duō)這(zhè)些變化(huà)。這(zhè)種LTBR驅動的(de)深度重編程也(yě)出現在所謂的(de)非常規T細胞中，比如γδT細胞，它們的(de)豐度比常規T細胞低，但可(kě)以靶向更多(duō)樣化(huà)的(de)腫瘤。
論文共同作者、紐約大(dà)學帕爾馬特癌症中心臨床淋巴瘤項目主任Catherine Diefenbach博士說，“最令人(rén)激動的(de)是證實了(le)LTBR和(hé)其他(tā)排名靠前的(de)基因改善了(le)CAR-T細胞和(hé)γδ T細胞的(de)抗原特異性反應。如果在體外和(hé)臨床測試中得(de)到驗證，這(zhè)可(kě)能對(duì)在未來(lái)針對(duì)淋巴性惡性腫瘤和(hé)其他(tā)癌症的(de)CAR-T細胞療法産生深遠(yuǎn)的(de)影(yǐng)響。”
這(zhè)些作者還(hái)将幾種排名靠前的(de)修飾基因與類似于FDA批準的(de)兩種現有血癌療法的(de)CAR-T細胞相結合：tisagenlecleucel（Kymriah）和(hé)axicabtagene ciloleucel（Yescarta）。幾乎所有測試的(de)修飾基因都提高(gāo)了(le)CAR-T反應，包括LTBR。由于與來(lái)自健康供者的(de)T細胞相比，來(lái)自癌症患者的(de)T細胞往往狀況不佳，他(tā)們還(hái)想測試LTBR使來(lái)自癌症患者的(de)T細胞恢複活力的(de)能力。他(tā)們将LTBR與CAR一起添加到被診斷爲彌漫性大(dà)B細胞淋巴瘤（一種血癌）患者的(de)功能失調的(de)T細胞中，并發現T細胞功能得(de)到了(le)類似的(de)提升，這(zhè)表明(míng)該技術可(kě)以作爲一種優化(huà)療法在臨床上發揮作用(yòng)。
英國卡迪夫大(dà)學醫學院T細胞與免疫療法專家Andrew Sewell博士（未參與這(zhè)項新的(de)研究）指出，“T細胞的(de)功能增益篩選具有巨大(dà)的(de)潛力，可(kě)以發現如何使免疫療法更加成功---特别是在目前CAR-T細胞療法效果不佳的(de)實體瘤中。”
這(zhè)些作者還(hái)發現，用(yòng)修飾基因增強的(de)T細胞不僅能夠更好地根除白血病，而且還(hái)能根除胰腺癌細胞。這(zhè)些結果不僅對(duì)開發用(yòng)于治療血癌的(de)增強型CAR-T療法是令人(rén)鼓舞的(de)，而且它們可(kě)能在靶向實體瘤方面發揮關鍵作用(yòng)，畢竟在實體瘤治療領域，建立高(gāo)效的(de)CAR-T細胞療法一直是更具挑戰性。
Sanjana實驗室一直專注于開發新的(de)基因編輯和(hé)功能基因組技術，以減少目前免疫療法的(de)高(gāo)失敗率并建立下(xià)一代療法。鑒于像LTBR這(zhè)樣新表征的(de)修飾基因可(kě)以與已經被批準上市的(de)CAR-T細胞療法協同發揮作用(yòng)，這(zhè)項新的(de)研究具有明(míng)顯的(de)潛力從實驗室走向臨床應用(yòng)和(hé)改善世界各地癌症患者的(de)治療效果。
腎細胞癌(RCC)是一個(gè)高(gāo)度未得(de)到滿足的(de)需求領域，代表著(zhe)相當大(dà)的(de)患者群體，據估計，美(měi)國每年有7.4萬新病例和(hé)1.5萬人(rén)死亡。腎癌的(de)新療法，包括PD-1靶向藥物(wù)和(hé)聯合療法，顯示出有希望的(de)初步反應，但CR(完全緩解)率較低，爲6-16%，突顯了(le)額外治療選擇的(de)必要性。
RCC是一種高(gāo)度T細胞浸潤性腫瘤類型，因此可(kě)能适用(yòng)于基于T細胞的(de)治療。過繼轉移表達嵌合抗原受體(CARS)的(de)T細胞是一種有希望的(de)治療方法，在血液系統惡性腫瘤中顯示出顯著的(de)益處，包括最近批準的(de)以CD19和(hé)BCMA爲靶向的(de)CAR T療法。
在本研究中，研究者首先産生并鑒定了(le)一組基于抗CD70單鏈抗體的(de)CAR T細胞。盡管CD70在T細胞上表達，但仍能從體外具有較強活性的(de)單鏈抗體亞群中産生CAR T。CD70 CAR的(de)表達在順式中屏蔽了(le)CD70的(de)檢測，并提供了(le)對(duì)CD70 CAR - t介導的(de)自相殘殺的(de)保護。兩種不同類型的(de)CAR T細胞具有不同的(de)記憶表型、激活狀态和(hé)細胞毒活性。
表位圖譜顯示，這(zhè)兩類CARs結合了(le)CD70的(de)獨特區(qū)域。CD70 CAR T細胞對(duì)腎癌細胞株和(hé)患者來(lái)源的(de)異種小鼠模型顯示出強大(dà)的(de)抗腫瘤活性。組織交叉反應研究發現淋巴細胞膜染色，從而與已知的(de)CD70表達模式相匹配。
在食蟹猴CD3-CD70雙特異性毒性研究中，研究者觀察到了(le)與T細胞激活和(hé)CD70表達細胞的(de)消除相關的(de)預期結果，包括細胞因子的(de)釋放和(hé)淋巴組織中細胞的(de)丢失。最後，通(tōng)過基于TALEN的(de)基因編輯消除T細胞受體，大(dà)規模生産高(gāo)功能的(de)CD70同種異體CAR T細胞。
圖爲 CD70-CAR的(de)表達保護CD70+細胞免受傷害
總之，在這(zhè)項研究中，研究者發現CD70在腎細胞癌中有較高(gāo)比例的(de)同源表達，這(zhè)表明(míng)它可(kě)能是一個(gè)有吸引力的(de)CAR T靶點。與以前的(de)報告一緻，研究者還(hái)發現活化(huà)的(de)T淋巴細胞上有表達。這(zhè)種表達可(kě)能會導緻CAR - T細胞自相殘殺，正如已經報道的(de)在T細胞上表達的(de)其他(tā)腫瘤靶點，如CD38和(hé)CD7。盡管有潛在的(de)自殺性，大(dà)量基于單鏈抗體的(de)CD70 CAR被成功地轉導并産生了(le)CAR T細胞。
在一項新的(de)研究中，利用(yòng)在結構生物(wù)學領域開發的(de)強大(dà)工具和(hé)技術，來(lái)自美(měi)國華盛頓大(dà)學和(hé)斯克裏普斯研究所的(de)研究人(rén)員(yuán)發現了(le)有關人(rén)類免疫缺陷病毒（HIV）的(de)新細節。這(zhè)些發現使人(rén)們關注這(zhè)種病毒表面上下(xià)的(de)基本結構，可(kě)能有助于設計和(hé)開發預防艾滋病（AIDS）的(de)疫苗。相關研究結果發表在2022年2月(yuè)17日的(de)Cell期刊上，論文标題爲“Cryo-ET of Env on intact HIV virions reveals structural variation and positioning on the Gag lattice”。
這(zhè)些詳細的(de)發現包括在整個(gè)HIV病毒的(de)背景下(xià)，這(zhè)種病毒的(de)包膜“刺突”蛋白（Env蛋白，在這(zhè)種病毒與宿主細胞結合時(shí)使用(yòng)）的(de)結構和(hé)位置的(de)三維視圖。通(tōng)常情況下(xià)，科學家們會觀察從這(zhè)種病毒中分(fēn)離出來(lái)的(de)蛋白顆粒，或者表達爲工程蛋白或純化(huà)蛋白。在另一項關鍵的(de)發現中，這(zhè)些作者對(duì)聚糖屏障（glycan shield）有了(le)新的(de)認識---病毒蛋白表面上存在的(de)可(kě)以将HIV隐藏在身體免疫系統之外的(de)糖鏈。
論文共同通(tōng)訊作者、華盛頓大(dà)學藥學院藥物(wù)化(huà)學副教授Kelly Lee說，“我們正在研究整個(gè)HIV病毒顆粒，以及這(zhè)種病毒表面上的(de)Env蛋白與該病毒的(de)其他(tā)部分(fēn)有什(shén)麽聯系。通(tōng)過觀察完整的(de)病毒結構，我們可(kě)以觀察到這(zhè)個(gè)‘病毒臉部’的(de)不同面是如何顯示的(de)，以及它們将如何被免疫系統識别或隐藏。”
針對(duì)HIV病毒表面上的(de)包膜刺突蛋白相對(duì)于該病毒内部蛋白結構（稱爲Gag晶格）的(de)定位，這(zhè)種完整的(de)HIV病毒視圖還(hái)使得(de)這(zhè)些作者獲得(de)了(le)新的(de)見解。
Lee說，“這(zhè)一發現推翻了(le)以前關于這(zhè)種病毒各部分(fēn)如何組裝的(de)模型，并有助于将我們的(de)注意力集中在這(zhè)兩種蛋白的(de)對(duì)接互動可(kě)能在哪裏發生。這(zhè)種對(duì)接互動需要更詳細地解析出，但這(zhè)項新的(de)研究至少給我們提供了(le)這(zhè)種病毒組裝的(de)正确架構模型。”
這(zhè)些作者指出，另一項以前沒有觀察到的(de)發現是支持病毒包膜蛋白的(de)“柄部（stalk）”是靈活的(de)，可(kě)以傾斜，這(zhè)對(duì)免疫系統中保護宿主細胞免受感染的(de)中和(hé)抗體來(lái)說既是機會又是挑戰。
論文共同通(tōng)訊作者、斯克裏普斯研究所免疫學與微生物(wù)學副教授Michael Zwick說，“結構生物(wù)學已經推動了(le)HIV疫苗的(de)設計，因此當我們越來(lái)越好地了(le)解我們的(de)目标是什(shén)麽時(shí)，這(zhè)激發了(le)創新，并可(kě)能導緻改進的(de)疫苗。”
Zwick補充說，HIV包膜爲疫苗開發提供了(le)一種特别困難的(de)靶标，因爲該病毒顯示的(de)包膜刺突蛋白非常少，并且用(yòng)聚糖分(fēn)子進行僞裝，以逃避我們的(de)免疫系統。
Lee說，“所有這(zhè)些特征增加了(le)HIV包膜刺突蛋白呈現給免疫系統的(de)動态變化(huà)性。這(zhè)是從事HIV疫苗開發的(de)人(rén)從一開始就在努力解決的(de)問題---這(zhè)種病毒以天文數字般的(de)速度發生突變和(hé)改變自己。每次它感染一個(gè)人(rén)，你都會在這(zhè)個(gè)人(rén)身上發現數以千計的(de)不同變異，如果你看一下(xià)不同的(de)人(rén)群，它的(de)變異甚至會更多(duō)。”
事實上，在今年2月(yuè)份，一種更加緻命的(de)HIV毒株被發現在荷蘭流傳。幸運的(de)是，雖然該毒株是一種 “高(gāo)度毒性的(de)變體”，但它仍然對(duì)抗逆轉錄病毒治療有反應。
Zwick說，“這(zhè)隻是再次提醒我們，這(zhè)種病毒總是在變化(huà)，所以我們需要科學家們繼續研究它。”
在一項新的(de)針對(duì)小鼠的(de)研究中，來(lái)自美(měi)國康奈爾大(dà)學、加拿大(dà)舍布魯克大(dà)學和(hé)英屬哥(gē)倫比亞大(dà)學的(de)研究人(rén)員(yuán)一種新發現的(de)小分(fēn)子可(kě)能能夠被噴到人(rén)們的(de)鼻子裏，以便在暴露之前預防COVID-19疾病，如果在冠狀病毒SARS-CoV-2感染後不久就進行治療，就可(kě)能提供早期治療。相關研究結果于2022年3月(yuè)28日在線發表在Nature期刊上，論文标題爲“A TMPRSS2 inhibitor acts as a pan-SARS-CoV-2 prophylactic and therapeutic”。
這(zhè)些作者使用(yòng)了(le)經過基因改造後在細胞表面上表達結合SARS-CoV-2的(de)人(rén)類受體的(de)實驗小鼠，并發現這(zhè)種名爲N-0385的(de)小分(fēn)子抑制這(zhè)種冠狀病毒進入小鼠體内的(de)細胞。他(tā)們證實作爲一種TMPRSS2抑制劑，N-0385能夠在小鼠暴露前保護其免受感染，同時(shí)在暴露後12小時(shí)内給送也(yě)能提供有效治療。
這(zhè)種治療方法有希望既能預防疾病，又能降低COVID-19感染後的(de)嚴重程度和(hé)死亡率，隻需每天服用(yòng)幾劑。
論文通(tōng)訊作者、康奈爾大(dà)學獸醫學院病毒學副教授Hector Aguilar-Carreno說，“已經發現的(de)能夠預防感染的(de)小分(fēn)子抗病毒藥物(wù)很少（如果有的(de)話(huà)）。這(zhè)是它的(de)第一個(gè)例子。一個(gè)優點是它在感染的(de)早期就起作用(yòng)，即使是在人(rén)們已經感染病毒之後，也(yě)是如此。”
圖爲 基于酮苯并噻唑（ketobenzothiazole）的(de)模拟肽是有效的(de)TMPRSS2抑制劑
這(zhè)種廣譜療法在暴露于2020年在美(měi)國華盛頓州檢測到的(de)首個(gè)SARS-CoV-2毒株以及Delta毒株的(de)小鼠身上進行了(le)測試，但還(hái)沒有在Omicron變體上進行測試，盡管這(zhè)些作者樂(yuè)觀地認爲它将繼續有效。
這(zhè)些作者在感染SARS-CoV-2之前、期間和(hé)/或之後将這(zhè)種小分(fēn)子經鼻腔遞送到小鼠體内。他(tā)們跟蹤了(le)這(zhè)些小鼠的(de)體重---因爲體重下(xià)降是感染的(de)信号，也(yě)是疾病的(de)一個(gè)很好的(de)指标---以及其他(tā)臨床和(hé)病理(lǐ)指标，如溫度和(hé)死亡率，還(hái)進行了(le)小鼠組織分(fēn)析，以了(le)解它們如何作出反應。該療法防止了(le)這(zhè)些小鼠在暴露于這(zhè)種冠狀病毒之前失去體重，也(yě)防止了(le)感染後死亡。Aguilar-Carreno說，即使在感染後12小時(shí)内，該療法也(yě)顯示出非常好的(de)療效。
一家位于加利福尼亞的(de)公司---EBVIA治療公司---目前正在爲開展人(rén)體臨床試驗、藥物(wù)開發、配方和(hé)大(dà)規模生産籌集資金。如果能迅速籌集到資金，并且如果人(rén)體臨床試驗證明(míng)是成功的(de)，該療法有望能在至少六個(gè)月(yuè)内提交給美(měi)國食品藥品管理(lǐ)局（FDA）以便獲得(de)緊急使用(yòng)授權。
Aguilar-Carreno說，“與其他(tā)類型的(de)COVID-19治療方法（如單克隆抗體）相比，N-0385藥物(wù)的(de)大(dà)規模生産更簡單，成本更低。”
盡管越來(lái)越多(duō)的(de)研究都揭示了(le)睡(shuì)眠不足對(duì)機體肥胖風險的(de)影(yǐng)響效應，但實驗證據非常有限，而且并沒有對(duì)機體體脂分(fēn)布相關的(de)研究，近日，一篇發表在國際雜(zá)志Journal of the American College of Cardiology上題爲“Effects of Experimental Sleep Restriction on Energy Intake， Energy Expenditure， and Visceral Obesity”的(de)研究報告中，來(lái)自梅奧診所等機構的(de)科學家們通(tōng)過研究發現，睡(shuì)眠不足及自由進食或會增加機體的(de)卡路裏消耗，從而導緻脂肪積累，尤其是腹部的(de)不健康脂肪。
在研究人(rén)員(yuán)進行的(de)這(zhè)項随機對(duì)照(zhào)交叉研究中，他(tā)們發現，相比對(duì)照(zhào)睡(shuì)眠組參與者而言，缺乏足夠的(de)睡(shuì)眠或會讓機體總體腹部脂肪面積增加9%，讓腹部内髒脂肪量增加11%，内髒脂肪會堆積在腹部深處内部器官周圍，同時(shí)與機體心髒和(hé)代謝性疾病發生密切相關；研究者表示，缺乏充足的(de)睡(shuì)眠往往是人(rén)體的(de)一種行爲選擇，而這(zhè)種選擇如今變得(de)越來(lái)越普遍，在美(měi)國有超過三分(fēn)之一的(de)成年人(rén)無法獲得(de)充足的(de)睡(shuì)眠，部分(fēn)原因是輪班或倒班，或者在傳統的(de)睡(shuì)眠時(shí)間使用(yòng)智能設備和(hé)社交網絡，此外，人(rén)們往往會在較長(cháng)的(de)清醒時(shí)間裏吃(chī)的(de)更多(duō)，同時(shí)還(hái)不增加體育鍛煉。
研究者Virend Somers說道，本文研究結果表明(míng)，即使在年齡、健康和(hé)相對(duì)瘦弱的(de)受試者中，睡(shuì)眠時(shí)間縮短也(yě)與機體卡路裏攝入量增加有關，同時(shí)體重的(de)增加幅度較小，而且機體腹部的(de)脂肪堆積水(shuǐ)平也(yě)會明(míng)顯增加。正常情況下(xià)，脂肪會優先沉積在皮下(xià)，然而，不充足的(de)睡(shuì)眠似乎會将脂肪轉向到更危險的(de)内髒區(qū)域，重要的(de)是，盡管在恢複睡(shuì)眠期間，機體的(de)卡路裏攝入和(hé)體重會降低，但内髒脂肪量卻會增加，這(zhè)或許就表明(míng)，睡(shuì)眠不足是此前科學家們并沒有認識到的(de)引起内髒脂肪堆積的(de)誘發因素，而且至少在短期内，補覺似乎并不會逆轉内髒脂肪的(de)堆積，從長(cháng)遠(yuǎn)角度來(lái)看，這(zhè)些發現或許表明(míng)，睡(shuì)眠不足是導緻肥胖、心血管疾病和(hé)代謝性疾病流行的(de)促進因素。
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